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    您的微量分(fēn)光光度計測蛋白(bái)有問題?大(dà)概率原因找到了

        微量分(fēn)光光度計主要用于核酸及蛋白(bái)質的濃度測定和純度評估。然而,在實際應用中(zhōng),經常會出現核酸較容易被準确測量,而蛋白(bái)質樣品的濃度測量偏差較大(dà)的情況。很多用戶也困惑于此,同樣是基于紫外(wài)吸收的檢測,爲何兩種樣品的檢測性能會有差異呢?


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        坊間也時常出現一(yī)些說法:微量隻能用于測核酸,而蛋白(bái)測不準。如果真是這樣的話(huà),那麽設備的使用率就會大(dà)打折扣了。傳聞是不可輕信的,我(wǒ)們還是需要了解原因,然後才能找出解決方案。

    先上一(yī)組數據看看

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        重複性和穩定性是評判設備性能的好方式,這三台基礎型Nanophotometer® N50T機型在正确的操作下(xià),對較低濃度和較高濃度樣品的測量,都能夠得到一(yī)緻的結果,CV<0.4%。如果設備性能都如此,那前面所述的問題就不存在了。

    普遍問題:蛋白(bái)樣品表面張力的影響


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        蛋白(bái)質樣品,相較于核酸而言,更容易出現表面張力降低的情況。因此,如果你的微量分(fēn)光光度計是采用樣品拉伸原理的,即形成液柱的方法,對于一(yī)些樣品而言,是難以進行測量的,這可能是造成測量準确性和重複性不好的大(dà)原因。



    01

    影響因素一(yī):溫度和揮發



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        通常來說,液體(tǐ)的溫度升高,由于分(fēn)子間引力減弱,表面張力會随之降低。這也解釋了爲何低溫保存的核酸樣品,張力較大(dà),更易形成液柱。在夏天實驗環境較熱,或者制藥用戶的恒溫恒濕實驗室,溫度是相對較高的,張力會随之下(xià)降。

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        等一(yī)下(xià),不是有空調嗎(ma)?空調産生(shēng)的氣流會大(dà)幅增加微量液體(tǐ)的揮發,暴露在空氣中(zhōng)的液柱易受到影響,對測量重複性影響較大(dà)。結果就是:房間熱易揮發,冷風吹也易揮發。

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    02

    影響因素二:鹽

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        無機鹽作爲一(yī)種非表面活性劑,具有水合作用,趨向于把水分(fēn)子拖入水中(zhōng),因此會增大(dà)表面張力,反之亦然。因此,脫鹽或低鹽的樣品,表面張力會降低,常見于蛋白(bái)純化的流程。例如在進行蛋白(bái)質結構分(fēn)析或質譜分(fēn)析時,樣品需經過脫鹽處理,這樣的樣品在進行濃度測量時,并不容易形成液柱。

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    影響因素三:表面活性劑

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        蛋白(bái)提取過程中(zhōng)經常使用的表面活性劑(清潔劑),如SDS、Triton X100,以及在發酵過程中(zhōng)加入的消泡劑等成份,會大(dà)幅降低樣品的表面張力(想想看,連維持泡沫的張力都沒有了),這些物(wù)質常會殘留在樣本中(zhōng),難以完全去(qù)除。因此,在工(gōng)藝過程中(zhōng)測量蛋白(bái)樣品,是一(yī)項挑戰。

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    影響因素四:固液接觸表面

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        當使用移液器将微量樣品加載到點樣台後,會出現液體(tǐ)與固體(tǐ)的接觸表面,點樣台表面的親水/疏水性質會影響液體(tǐ)的表面張力。因此,使用拉伸法的主流品牌微量分(fēn)光光度計,點樣台表面具有疏水性塗層,會增大(dà)液體(tǐ)的張力。但是,随着使用損耗,塗層會逐漸消耗,需要定期使用試劑進行維護和再生(shēng)。在正确的維護之後,這一(yī)影響因素也随之消失,但也增加了維護成本,而大(dà)多數用戶并不知(zhī)道這一(yī)點。

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    這麽麻煩?我(wǒ)還測不測了!

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    我(wǒ)們換個思維,如果一(yī)台微量分(fēn)光光度計的測量原理,并不依賴于液體(tǐ)的表面張力呢?Implen就可以,采用樣品壓縮技術的Nanophotometer®檢測時無需形成液柱,而是将液滴壓縮爲很薄的液膜。因此,無論核酸、蛋白(bái),都可以使用Nanophotometer®輕松測量。而封閉式的檢測環境,也很好的保護了樣品免受揮發影響。

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        無論是純化蛋白(bái)、總蛋白(bái)、結合蛋白(bái)、還是肽段樣品,Nanophotometer®都有豐富的APP程序和方法學應用,以及我(wǒ)們的技術團隊提供的支持,使您在蛋白(bái)濃度測量中(zhōng)遇到的問題迎刃而解。

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