視網膜

視網膜是眼球中(zhōng)重要的結構之一(yī)，它是位于眼球壁内層的一(yī)層透明薄膜，周圍布滿了大(dà)量的感光細胞和神經纖維，通過它可以直接接受來自外(wài)界環境的光線并在眼球内形成影像，通過神經纖維将影像信息傳送至大(dà)腦中(zhōng)樞形成視覺。

其它中(zhōng)樞神經系統内也有小(xiǎo)膠質細胞，在健康的視網膜中(zhōng)，神經元和小(xiǎo)膠質細胞之間的交流對維持神經元向大(dà)腦發送信号的能力非常重要。

視網膜血管作爲人體(tǐ)内可以進行非創傷直接觀察的深層微血管，其生(shēng)理狀況的檢查對高血壓、糖尿病、動脈硬化等心血管疾病的診斷、治療評價具有重要意義。

一(yī)般而言，眼底圖像通常都是通過激光掃描成像進行采集，但是由于眼底可觀測的視野往往是很有限的，一(yī)個患者的眼底信息需要多張掃描圖像才能完全顯示出來。這種局限性大(dà)大(dà)不利于病情進行全面的、細緻的診斷。Tissue Cytometry全景組織流式定量分(fēn)析技術進行全景圖像獲取，在單細胞、組織結構、細胞空間信息等多個層面進行定位、定性、定量分(fēn)析。從而更好的對病變區域進行有針對性的跟蹤觀察和全面分(fēn)析。

實驗目的

視網膜熒光樣本中(zhōng)小(xiǎo)膠質細胞胞體(tǐ)、神經纖維識别、血管識别、血管斑點識别、神經元與血管的距離(lí)分(fēn)析。

實驗流程

1. 利用TissueFAXS系統進行玻片熒光的全景掃描。

2. 使用StrataQuest分(fēn)析軟件進行定量分(fēn)析。

3. 根據FITC通道識别神經胞體(tǐ)并篩選出細胞胞體(tǐ)（細胞核識别算法）。

4. 膜識别FITC染色信号的區域确定神經纖維，并對不同長度神經纖維進行分(fēn)類。

5. 識别血管的Texa Red染色區域面積及強度。

6. 計算神經元與血管間的空間距離(lí)，并統計數量和占比。

7. 根據毛細血管亮斑的識别結果，統計新生(shēng)小(xiǎo)血管數量。

實驗過程

單通道灰階圖（↑：FITC，↓：Texa Red）

根據染色強度，染色面積，細胞形态學，利用正反向回溯功能和設門圈選Gating，排除雜(zá)質，細胞碎片，黏連細胞（綠色框線标記），獲得神經元胞體(tǐ)，（粉色框線标記），并将胞體(tǐ)按照面積分(fēn)爲兩類（散點圖）。

由于該視網膜樣本是标記的小(xiǎo)膠質細胞，根據面積将神經胞體(tǐ)分(fēn)爲兩類（Small bodycell，Big bodycell），反向回溯Big bodycell中(zhōng)的細胞後，應用Input Gate功能篩選短粗的神經纖維，作爲激活态的小(xiǎo)膠質細胞。

激活态小(xiǎo)膠質細胞識别

血管識别：根據Texa Red通道進行識别，并去(qù)除面積小(xiǎo)的及非同一(yī)焦面的血管，僅對确定的清晰的同一(yī)焦面的大(dà)血管進行面積統計。

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離(lí)

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離(lí)0-0.1μm（紅色框線标記）

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離(lí)0.1-1μm（粉色标記）

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離(lí)1-3μm（粉色标記）

此外(wài)，Tissue Cytometry散點圖-熱力圖-數據同屏疊加對比功能，可以整合多種數據分(fēn)析的二維圖像，便于研究者們直觀的對比與校驗；同屏對比功能，不但可以同屏預覽，還可以支持多點實時聯動縮放(fàng)，便于觀察/分(fēn)析圖像，打通信息分(fēn)析時數據-圖像之間的屏障。