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    前分(fēn)光?後分(fēn)光?你了解你的超微量嗎(ma)?

     紫外(wài)-可見(UV-Vis)分(fēn)光光度計通過測量紫外(wài)和可見光波段的光吸收對樣品進行定量和鑒定。分(fēn)光光度計的曆史前身可以追溯到1814年,當時約瑟夫·馮·弗勞恩霍夫(Joseph von Fraunhofer)(弗勞恩霍夫應用研究促進協會的贊助人)利用自己發明的分(fēn)光光度計測量太陽光并發現太陽光譜中(zhōng)的574條暗譜線(弗勞恩霍夫線)。

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    而一(yī)台商(shāng)用紫外(wài)-可見分(fēn)光光度計是阿諾德·貝克曼在1941年推出的,該儀器利用石英棱鏡将鎢燈發出的光分(fēn)離(lí)爲吸收光譜,并利用光電(diàn)管(光電(diàn)二極管的前身)記錄信号。爲了說明光源和電(diàn)子設備的背景影響,紫外(wài)-可見分(fēn)光光度計測量通過樣品的光的強度,并自動減去(qù)背景,以提供代表樣品測定特性的精确讀數。

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    分(fēn)光光度計發展到今天,已成爲生(shēng)命科學、醫藥科學、分(fēn)析化學等領域重要的儀器。而超微量分(fēn)光光度計的出現,讓分(fēn)析所需的樣品量降低至微升級别,特别适合于生(shēng)命科學珍貴樣品的的定量分(fēn)析。Implen于2005年推出的Label Guard超微量比色皿,使任何用戶都可以在常規紫外(wài)分(fēn)光光度計上進行微量樣品測量,而2006上市的Nanophotometer®系列超微量分(fēn)光光度計,标志(zhì)了“後分(fēn)光“時代的開(kāi)始。

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    微量紫外(wài)-可見分(fēn)光光度計與常規的分(fēn)光光度計相比,有着不同的設備結構,其特性是能夠于獲得全光譜分(fēn)析結果,使得核酸、蛋白(bái)質等樣品可被定量及分(fēn)析。常規分(fēn)光光度計常采用前置分(fēn)光器(如光栅),使光源發出的複色光分(fēn)光爲單色光,這能夠讓入射光保持很好的單色性,單色光穿過樣品池産生(shēng)吸收,由二極管或倍增管檢測器檢測光強度。當光栅進行轉動時,就會有不同波長的單色光逐一(yī)通過樣品池,這時就可進行光譜掃描測量。

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    雖然在靈敏度、噪音、雜(zá)散光等方面具備優勢,但光譜掃描所需的時間往往是較長的,這并不太适合于生(shēng)命科學樣品的定量及光譜分(fēn)析。因此,目前市面上大(dà)多數的用于測量生(shēng)命科學樣品的微量分(fēn)光光度計采用的是相反的光學結構,即“後分(fēn)光”形式。

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    由氙燈光源發出的複色光,通過樣品(微量或比色皿樣品),在相應的波長下(xià)分(fēn)别産生(shēng)吸收,減弱的複色出射光通過分(fēn)光器進行分(fēn)光,後由陣列式檢測器同時檢測所有波長對應的吸光值。陣列式檢測器通常爲CCD,爲長條形結構,每個像元組能夠精确的檢測對應的波長。因此,嚴謹的說,微量分(fēn)光光度計的全光譜測量,是無需“掃描“的”,而是同時獲得的。

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    因此,微量分(fēn)光光度計的核心部件中(zhōng),氙燈替代了鎢燈氘燈組,後分(fēn)光結構替代了前分(fēn)光結構,陣列式CCD檢測器替代了光電(diàn)二極管檢測器。在同時,也完全能夠滿足樣品測量準确性的要求,可謂是爲大(dà)分(fēn)子定量分(fēn)析量身定制的儀器。而Nanophotometer®出衆的全光譜測量性能,也廣泛應用于分(fēn)析化學領域。

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    後分(fēn)光的結構還有其優勢,由于分(fēn)光器是固定的,無需轉動進行光譜掃描,因此波長的穩定性是非常好的。而掃描式分(fēn)光光度計必須考慮分(fēn)光器轉動導緻的波長漂移問題,需要定期檢測或調整。在後面幾期我(wǒ)們将介紹儀器的檢定問題,會具體(tǐ)介紹。

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    無論是前分(fēn)光,還是後分(fēn)光,都各具特點,也适合于不同的應用需求。充分(fēn)的了解構造和原理,有助于您合理的選擇和正确的使用儀器。德國Implen 18年來一(yī)直專注于微量樣品吸光度測量領域,我(wǒ)們以豐富的制造和應用經驗爲用戶提供有效的産品,也熱衷于分(fēn)享知(zhī)識與傳遞價值。Implen是值得您信賴的超微量品牌。



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