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    值得收藏的幹貨 - 超微量分(fēn)光光度計性能檢查的常用方法

    超微量分(fēn)光光度計作爲常用的核酸、蛋白(bái)等生(shēng)物(wù)大(dà)分(fēn)子的定量和表征工(gōng)具,廣泛應用于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)制藥等領域,用戶僅需微量樣品即可獲得濃度及吸光度結果。然而在日常使用中(zhōng),一(yī)些用戶會對測量結果有疑慮,尤其是當測量結果與預估的結果出現較大(dà)差異,或與使用其他方法的定量結果有差異時,用戶往往會懷疑設備出現問題或故障。

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    實際上,作爲精密的分(fēn)析儀器,設備出現問題的幾率并不高,尤其是當設備正常使用和日常維護時,更多的問題可能由外(wài)部因素導緻,如樣品的均質、顆粒物(wù)或氣泡幹擾等。本文提所列的方法可幫助您判定設備的狀态,以便您放(fàng)心的進行測量工(gōng)作。

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    标準品測量

    常用的标準品可使用BSA或核酸标準品,可從各試劑廠家購買,或使用如BCA定量試劑盒,QUBIT核酸定量試劑盒中(zhōng)的标準品。請注意标準品要在效期之内,且保存得當(通常低溫)。也可以使用設備廠家提供的小(xiǎo)分(fēn)子化合物(wù)标準品,如Implen提供的PHP标準品。标準品是有等級區分(fēn)的,通常附帶有檢定證書(shū)的标準品,标稱濃度會更準确。

        特别指出的是,使用未知(zhī)濃度的樣品,來評估不同設備的測量結果,并以其中(zhōng)一(yī)台作爲基準,判定另外(wài)一(yī)台的準确性,是完全錯誤的。

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    重複性測量

    在缺乏标準品,或标準品由于保存不當狀态已存疑時,可使用未知(zhī)濃度樣品做重複性測試。這可以判斷設備的穩定性,以排除一(yī)些潛在問題,如樣品台損壞、樣品的非均質,成分(fēn)幹擾等。雖然不能确定準确性誤差,但重複性很好的設備,很大(dà)幾率是沒有大(dà)問題的。當然,這需要結合您的允差要求,綜合考量。

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    梯度稀釋測量

    使用已知(zhī)濃度或未知(zhī)濃度的樣品,均可進行梯度稀釋測量,以驗證設備的線性穩定性。使用設備的标準曲線功能可便捷地完成此項測試,并給出線性回歸。當梯度稀釋的R2趨近于1,設備的線性完全可滿足廣泛的動态範圍内的測量要求,同時也可反映設備的良好狀态。需要注意的是,梯度稀釋時要選擇定期校準過的,準确性好的移液器,且正确操作。


    基線穩定性測量

    光源和CCD檢測器,作爲設備的核心組件,其穩定性對于設備而言是非常重要的,而基線測量可以很好地反映這些部件的狀态。使用水(或空氣)作爲空白(bái),并且用水(或空氣)作爲樣品,做多次重複測量,如果吸光值的漂移很小(xiǎo),通常可反映設備的光學系統組件狀态正常。

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    光譜曲線

    正常的核酸和蛋白(bái)質樣品,或者其他化合物(wù)樣品,都具有典型的吸收曲線。異常的曲線往往說明樣品的問題,或設備光路系統可能存在的問題。光譜曲線可作爲測量結果可靠性的參考,且多數設備可根據曲線給出樣品潛在問題的警告。

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     通過以上測試方法,可以評估設備的狀态和試驗數據的可靠性。實際工(gōng)作中(zhōng),由于設備本身原因導緻的測量不準确畢竟是占少數的。規範操作,正确使用應是用戶更應關切的核心。後續,我(wǒ)們将爲您解讀關于超微量測量樣品時的一(yī)些常見誤區,希望您持續關注,更加惬意地使用您的Nanophotometer®。


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